Binding characteristics and regulation of the 17,20β,21-trihydroxy-4-pregnen-3-one (20β-S) receptor on testicular and sperm plasma membranes of spotted seatrout (Cynoscion nebulosus)

The binding characteristics of 17,20,21-trihydroxy-4-pregnen-3-one (20-S) to plasma membranes prepared from the testes and sperm of spotted seatrout (Cynoscion nebulosus) were investigated using a filtration method to retain the bound 20-S. A single class of high affinity (K_d = 17.9 nM), low capacity (B_max = 0.072 nM g^-1 testes) binding sites was identified by saturation and Scatchard analyses on testicular membranes of spermiating spotted seatrout. A corresponding receptor (K_d = 22.17 nM, B_max = 0.00261 nM ml^-1 milt) was also detected in spermatozoan membrane preparations. The rates of 20-S association and dissociation were rapid, both had T_halfs of less than 1 min. Competition studies indicated that the receptor was highly specific for 20-S. 17,20-dihydroxy-4-pregnen-3-one, which had the highest affinity of the other steroids tested, had a relative binding affinity (RBA) of 14.3%. Progesterone, 11-deoxycortisol and testosterone competed with an order of magnitude less affinity (RBA's of 7.4, 1.8 and 1.1%, respectively). Estradiol displayed low affinity for the receptor (RBA = 0.4%) and cortisol did not cause any displacement at 1000-fold excess concentration. Specific 20-S receptor binding was detected in plasma membranes from testes of both spermiating and non-spermiating seatrout and on spermatozoa. Prolonged incubation of testicular fragments from a spermiating fish with gonadotropin (15 IU ml^-1 human chorionic gonadotropin) or forskolin (10 µM) caused a 2–3 fold increase in membrane receptor binding. Previous studies have shown that gonadotropin-induced upregulation of the 20-S plasma membrane receptor in seatrout ovaries is required for the oocytes to become responsive to 20-S and undergo final maturation. The existence of a 20-S membrane receptor on sperm and its upregulation in the testes by gonadotropin raises the possibility that final maturation of spermatozoa in male seatrout may be regulated by a similar mechanism.     

H-Y抗血清的制备及检测研究

选用８ ～１２ 周龄纯系的 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ Ｃ 母鼠， 用同日龄的 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ Ｃ 公鼠采取皮肤移植和脾细胞注射２ 种方式免疫， 制备 Ｈ Ｙ 抗血清， 经精子微量细胞毒性试验， 筛选抗血清。皮肤移植５ 只小鼠中只有１ 只产生较好的抗血清， 脾细胞注射的４ 只小鼠都能产生较好的抗血清， 产生抗血清的小鼠占５５ ％ 。抗血清与昆明鼠正常８ｃｅｌｌ 早期桑椹胚培养５ ～６ 、１８ 和２４ ｈ 后， 退化率达４３３ ％ ， 经 Ｘ２ 检验差异不显著（ Ｐ ＞ ００５） ， 符合自然性比例。     

虾夷扇贝精子的主要生理特性与低温保存

试验结果表明,虾夷扇贝精子的最适盐度为23.2～32,最适pH 7.0～8.5.4℃,未稀释精液样品保存5 d后,精子仍有(26±4)%的活力,而经海水稀释后的精液保存70 h后,最高活力仅为(11±1.41)%,用抗冻液稀释的精液,4℃保存5 h后,得到最高的精子活力仅为(24.7±4.16)%.添加抗冻剂后,-18℃的保存效果明显低于4℃保存的未稀释样品.用4℃保存的未稀释精液与栉孔扇贝卵子进行杂交试验,保存3 d内的精子获得的授精率与对照组差异不显著(P0.05).杂交组的幼虫可以正常发育至D形幼虫,与自交组无区别.     

棕熊精子体外获能及异种穿卵的超微结构研究

对棕熊精子体外获能前后和异种穿卵的超微结构观察表明,棕熊精子全长77μm,由头、颈和尾3部分组成.头部长7.3μm,宽2.5μm,主要由核、顶体及顶体后区组成;颈部由中心粒和9条纵行分节的节往组成;尾部全长68.2μm,其中中段长13.2μm,线粒体为65～68旋,主段中央为“9 2”的微管结构,其外方被9条致密纤维和纤维鞘包裹.精子获能前群集成簇,运动缓慢;获能后精子呈超激活运动.获能的精子质膜膨胀,顶体外膜囊泡化,引起顶体反应,质膜并未参加囊泡化.顶体反应完成后,仅有顶体内膜包在精子核膜的外面.棕熊精子与仓鼠的卵相互作用,多以赤道段和顶体后区附着于卵膜.     

提高奶牛冷冻精液使用效果的措施

如何提高奶牛冷冻精液的使用效果,在奶牛繁殖中是人们一直追求的目标。作者根据多年的实际生产经验,在冷冻精液的解冻液配方、冷冻方式、解冻温度、解冻后的保存温度等方面进行了改进,取得了较好的效果。     

用冻干精子生产ICSI小鼠

前期研究中，我们采用小鼠卵母细胞胞浆内精子注射（ICSI）技术，成功地用新鲜精子获得了生理健康的ICSI小鼠。在此基础上，本文结合细胞冻干技术，进行了冻干精子ICSI生产试管小鼠的尝试。B6D2F1成年公鼠的精子在Tris-HCl-EDTA（pH8.2）溶液中冻干4 h后解冻，将其精子头注入到KM小鼠成熟卵母细胞的胞质中。6 h后，83.0%的卵子受精。用CZB溶液体外培养发现，冻干精子生产的胚胎，体外发育至2-C (92.0% vs 99.5%)、4-C（52.7% vs 97.2%）、桑椹胚（36.6% vs 86.3%）和囊胚的比例（21.4% vs 68.7%）极显著地（p<0.01）低于新鲜精子生产的ICSI胚胎。移植2-C期冻干精子ICSI胚胎检测体内发育，结果发现，D10的着床率为63.0%（17/27）；胎鼠的出生比例为21.7%（13/60），这些ICSI小鼠成年后的生理和生殖能力正常。试验结果说明，精子冻干后，仍能生产ICSI动物，冻干技术可以用于哺乳动物精子的保存。     

牛精子体外获能前后元素变化的研究

 本文应用x射线能谱技术，对获能前后精子质膜表面（头部、中段）和内部（顶体内、中段线粒体内）的元素进行了分析测试。结果表明，牛精子用肝素+咖啡因体外获能后，头部、中段质膜表面的Na、Al、S、K含量升高，Cl、Ca含量降低；顶体内Na、Mg、Si、P和Fe含量降低，而Ca、K、Cl和S含量升高；精子中段线粒体内Na、P、Si、Cl和Ca升高，而Mg、S、K和Fe却降低。获能过程中精子顶体内Na/Ca、Na/K、Cl/Ca、Cl/K和Na/Cl的浓度比分别为42.13、12.43、15.36、45.31和2.74；而摩尔比又分别为73.42、21.13、17.37、4.99和4.23。本文并对可能的获能机理进行了讨论。     

葡萄双受精过程的形态学观察

观察了葡萄双受精过程中雌雄性核的融合。结果表明:花粉管通过珠孔穿入退化助细胞,释放出二精子;精子核接近并贴附在卵核和次生核上,二者核膜融合,精核沉入卵核及次生核,染色质松解,并与雌性核染色质融合,出现雄性核仁,两性核仁融合,形成合子及初生胚乳核。卵核完成受精较次生核晚。受精属有丝分裂前型。精核进入卵核前看到了它的核仁。少数胚囊具有两套卵器。     

家兔精子体外获能与体外受精试验

本试验目的在于建立一种简便而有效的系统,能使家兔射出的精子完成体外获能,并获得体外受精、早期卵裂和正常产仔。精子体外获能采用三种方法:A.HIS(15min)+DM(1～2h);B.HIS(15min)+DM(11～12h);C.m-HIS(15min)+m-DM(2～4h)。经上述方法处理的精子与512枚输卵管卵母细胞进行体外受精和体外培养的结果表明,A组的受精和早期卵裂发育延迟;B组的受精卵大都停留在原核期;C组的受精和早期卵裂发育正常。将C组60枚2-4细胞移植至9只受体兔,5只妊娠,其中2只产4只试管仔兔,另外3只获得12个胎儿。